产品货号：
BTN80104
中文名称：
一站式miRNA柱式提取试剂盒
英文名称：
One-stop miRNA column extraction kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。
保存条件：4℃，有效期一年。
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理100mg左右的各种组织，可以在1.5mL塑料离心管中。如果处理样品量大，请分成很多相当于微量提取的量进行，最后再收集在一起。
附录：
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- 一步法直接分离纯化小RNA，比两步法(先分离总RNA和再纯化其中的小RNA)和PAGE电泳回收法更简单。得到的小RNA长度大部分在200nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
- 柱式操作，比miRNA提取试剂盒更加简单快捷，整个过程只需要十多分钟。
- 适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
- 小RNA纯净，OD260/280一般都在1.9以上。
- 产率一般为20～40μg/100mg动物组织。
- 无基因组DNA的污染。
- 可用于RT-PCR、miRNA标记、microarray等后续实验。
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 25mL |
| 溶液B | 25mL |
| 溶液C | 50mL |
| 离心吸附柱 | 100套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
| 说明书 | 1份 |
保存条件：4℃，有效期一年。
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理100mg左右的各种组织，可以在1.5mL塑料离心管中。如果处理样品量大，请分成很多相当于微量提取的量进行，最后再收集在一起。
- 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合，然后根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。
- 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
- 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1～5×106悬浮细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
- 对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50～100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/mL裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
- 对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50～100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
- 对RNAhold保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，每50～100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
- 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
- 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯仿(1mL裂解物需0.2mL氯仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
- 12000～15000g室温离心3～5分钟。
- 将上清液(约0.6～0.8mL)转移到一根离心吸附柱中以去除大RNA(最好标记以跟后面要用的专门吸附小RNA的另一离心吸附柱区别开来，本试剂盒提供的离心吸附柱之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA吸附，另一个做小RNA吸附)。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
- 12000～15000g室温离心半分钟，收集管中的穿透液。大RNA及DNA将与离心吸附柱的膜结合，小RNA将存在于穿透液中。但由于离心吸附柱的最大吸附能力为40μg动物RNA，20μg植物RNA，如果样品中的大RNA含量高于上面数值，则穿透液中将同时含有大RNA和小RNA，在此情况下，穿透液需要再次重复上柱以去除大RNA。由于此时离心吸附柱已经吸附了大RNA，所以需要预处理(具体步骤见本手册最后的附录)。
- 在最后得到的不含大RNA的穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约1.5mL。
- 先转移约0.75mL到一新的离心吸附柱中。注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱。12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 将上步上柱剩余的样品转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。此步一般可以省略。
- 12000～15000g室温离心半分钟以甩出残联液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响miRNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入50-100μLRNA洗脱液。
- 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
附录：
- 将结合有大RNA和DNA的离心吸附柱中加入0.1mL自备的超纯水，12000～15000g室温离心半分钟，弃收集液。
- 再加0.1mL自备的超纯水，重复上步一次。
- 将第5步的得到、需要进一步去除其中大RNA和DNA污染的穿透液直接上柱，12000～15000g室温离心半分钟，收集穿透液(此穿透液含小RNA)。
- 如果大RNA已经去干净，可以直接进入第6步；如果大RNA没有去除干净，则用本附录1-2的方法处理离心吸附柱，然后再将此穿透液加入(接本附录第3步)。一般样品只需要额外处理一次就可以去除全部的大RNA污染。
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